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कुत्तों में हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा

कुत्तों में हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा


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कुत्तों में हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा लगभग 30% मामलों में प्राथमिक रसौली के रूप में होता है[@b1]। कई अध्ययनों ने एचसीसी [@b2][@b3] के रोगियों में विभिन्न प्रकार के चिकित्सा उपचार जैसे कि कीमोथेरेपी, रेडियोथेरेपी और सर्जिकल रिसेक्शन की प्रभावशीलता की सूचना दी है। कुत्तों में एचसीसी का पूर्वानुमान आमतौर पर खराब होता है[@b4], और एचसीसी मेटास्टेसिस की सबसे लगातार साइट फेफड़े, पेरिटोनियम और डायाफ्राम हैं। पेरिटोनियम को मेटास्टेसाइज करने वाले लीवर एचसीसी वाले रोगियों की उत्तरजीविता लगभग एक महीने की होती है[@b5]। इस प्रकार, वर्तमान अध्ययन ने जांच की कि क्या पेरिटोनियल मेटास्टेस (पीएम) के लिए चिकित्सीय रणनीति एचसीसी के साथ कुत्तों के अस्तित्व में सुधार कर सकती है।

हेपेटोकार्सिनोमा एक घातक ट्यूमर है जो हेपेटोसाइट्स[@b1] से प्राप्त होता है। हाल ही में, Hep3B, HepG2, Huh-7, और Hep4070 सहित मानव HCC सेल लाइनों को Hep3B कोशिकाओं से स्थापित किया गया था[@b6]। कुत्तों में एचसीसी (जो मानव एचसीसी का अध्ययन करने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला पशु मॉडल है) आम तौर पर यकृत कार्सिनोमा कोशिकाओं (Hep3B)[@b7] से प्राप्त होते हैं। सेल कल्चर के लिए, माध्यम में भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) की सही सांद्रता का उपयोग करना महत्वपूर्ण है, और बहुत अधिक या बहुत कम FBS से कोशिका मृत्यु हो सकती है[@b8]। FBS की आदर्श सांद्रता 5% और 10%[@b8] के बीच है। इस अध्ययन में, हमने मध्यम में FBS की उपयुक्त सांद्रता का निर्धारण करने के लिए Hep3B कोशिकाओं में इन-विट्रो प्रयोग किए। इन प्रयोगों के परिणामों के आधार पर, एचसीसी कोशिकाओं के लिए सीरम-मुक्त मीडिया (एसएफएम) का उपयोग संदूषण की संभावना को कम करने और पशु प्रयोगों में प्रतिरक्षा अस्वीकृति से बचने के लिए किया गया था। हमारे प्रयोगों के परिणामों ने सुझाव दिया कि एचसीसी कोशिकाएं एक एसएफएम में अच्छी तरह से जीवित रह सकती हैं, और इन कोशिकाओं का उपयोग भविष्य में इन-विवो प्रयोगों के लिए किया जा सकता है।

हाल ही में, एचसीसी को कुत्तों में मौत का प्रमुख कारण माना गया[@b9]। हालांकि, एचसीसी के लिए उपयुक्त पशु मॉडल की कमी के कारण, कैनाइन एचसीसी के रोगजनन को कम समझा जाता है। कुत्तों में एचसीसी को प्रेरित करने के लिए कई प्रयोगात्मक तरीके विकसित किए गए हैं[@b4][@b9][@b10]। हमारे अध्ययन में, हमने कुत्तों में एचसीसी को प्रेरित करने के लिए दो तरीकों का इस्तेमाल किया, जिसमें डीएमबीए द्वारा शुरू किए गए हेपेटोकार्सिनोजेनेसिस और सीसीएल ~ 4 ~-प्रेरित हेपेटोकार्सिनोजेनेसिस शामिल हैं। इन दोनों विधियों से एचसीसी के पैथोलॉजिकल वर्गों ने समान परिणाम दिखाए। जैसा कि रिपोर्ट किया गया है, डीएमबीए द्वारा शुरू किए गए हेपेटोकार्सिनोजेनेसिस में ट्यूमर का गठन 6 महीने के उपचार के बाद किया गया था [@ b4]। हमारे अध्ययन में, ट्यूमर 6 महीने के बाद बने। हालांकि, 12 महीने के उपचार के बाद CCl ~ 4 ~ -प्रेरित हेपेटोकार्सिनोजेनेसिस में ट्यूमर का गठन किया गया था। यह परिणाम बीज़ एट अल के परिणामों के अनुरूप था।[@b10]। बड़े नमूना आकार और लंबे अवलोकन समय के कारण, हमारा मॉडल एचसीसी के दीर्घकालिक परिणाम को देखने के लिए उपयुक्त है।

एचसीसी के तीन उपप्रकार हैं: छोटी कोशिका कार्सिनोमा, बड़ी कोशिका कार्सिनोमा, और मिश्रित कोशिका कार्सिनोमा[@b2]। एचसीसी के हिस्टोपैथोलॉजिकल वर्गीकरण का उपयोग रोग निदान प्रदान करने के लिए किया गया है। हालांकि, कुछ नैदानिक ​​स्थितियां और प्रयोगात्मक विधियां हैं जो एचसीसी के रोग संबंधी वर्गीकरण में हस्तक्षेप कर सकती हैं[@b11]। इस प्रकार, एचसीसी के वर्गीकरण को और अधिक सत्यापित करने के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का उपयोग किया गया था। हमने कैनाइन एचसीसी के विभिन्न उपप्रकारों का पता लगाने के लिए एचसीसी मार्करों एएफपी, सीके, जीपीसी3 और सीजीए का इस्तेमाल किया। हमारे अध्ययन में, हमने पाया कि एचसीसी उपप्रकारों के अलग-अलग परिणाम हैं। CgA ने बड़े सेल कार्सिनोमा और मिश्रित सेल कार्सिनोमा में पता लगाने के सबसे संवेदनशील परिणाम दिखाए। छोटे सेल कार्सिनोमा और मिश्रित सेल कार्सिनोमा में GPC3 का पता चला था। हालांकि, किसी भी एचसीसी उपप्रकार में एएफपी और सीके सकारात्मक नहीं थे। हालांकि एचसीसी को छोटे सेल कार्सिनोमा, बड़े सेल कार्सिनोमा और मिश्रित सेल कार्सिनोमा में विभाजित किया गया था, हमारे अध्ययन में इसका वर्गीकरण अभी भी प्रारंभिक था। कुछ एचसीसी उपप्रकार (जैसे, छोटे सेल कार्सिनोमा) थे जिनका पता नहीं लगाया जा सका। ऐसा इसलिए हो सकता है क्योंकि कुत्तों में एचसीसी के उपप्रकार मानव से अलग थे।

सारांश में, लीवर ट्यूमर मॉडल जिसका हमने अपने अध्ययन में उपयोग किया था, अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य था और इसे विभिन्न शोध पहलुओं में इस्तेमाल किया जा सकता था। हमने प्रदर्शित किया कि इस अध्ययन में हमने जो एचसीसी मॉडल स्थापित किया, वह मानव एचसीसी के अनुरूप था। इस प्रकार, हमारे अध्ययन के परिणामों का उपयोग एचसीसी के खिलाफ यौगिकों की जांच में किया जा सकता है।

सामग्री और तरीके

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जानवरों

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इस अध्ययन में कुल 24 कुत्तों का इस्तेमाल किया गया, जिसमें 11 अक्षुण्ण नर बीगल और 13 अक्षुण्ण मादा बीगल शामिल थे। कुत्तों की उम्र 8 महीने से 4 साल तक की थी। कुत्तों को एनिमल एंड प्लांट केयर रिसर्च इंस्टीट्यूट, चाइनीज एकेडमी ऑफ साइंसेज (बीजिंग, चीन) के प्रायोगिक पशु केंद्र से लिया गया था। उन्हें पशु प्रायोगिक केंद्र में केनेल में रखा गया था और भोजन और पानी के साथ खिलाया गया था। जानवरों को एनिमल एंड प्लांट केयर रिसर्च इंस्टीट्यूट के संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुपालन में लाया गया था। प्रोटोकॉल को पशु और पादप देखभाल अनुसंधान संस्थान की पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।

कोशिका कल्चर

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तीन डॉग लीवर सेल लाइन्स (DH82, Hep3B, और HLF) और दो ह्यूमन लिवर सेल लाइन्स (HepG2 और HuH-7) चाइनीज एकेडमी ऑफ साइंसेज (शंघा, चीन) के सेल रिसोर्स सेंटर द्वारा प्रदान किए गए थे। Dulbecco के संशोधित ईगल माध्यम (DMEM) में 5% (v / v) भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS), 100 U / ml पेनिसिलिन और 100 μg / ml स्ट्रेप्टोमाइसिन युक्त कोशिकाओं को सुसंस्कृत किया गया था। कोशिकाओं को 37 डिग्री सेल्सियस पर 95% ओ ~ 2 ~ / 5% सीओ ~ 2 ~ युक्त एक आर्द्र इनक्यूबेटर में ऊष्मायन किया गया था।

ट्यूमर के ऊतकों से लीवर कैंसर कोशिकाओं का अलगाव

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ट्यूमर के ऊतकों से कैंसर कोशिकाओं को अलग करने के लिए कुल तीन कुत्तों का इस्तेमाल किया गया था। ऊतकों को 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए कोलेजनेज़ IV (0.5 मिलीग्राम / एमएल) के साथ पचाया गया और एकल कोशिकाओं को तैयार करने के लिए 75 माइक्रोन स्टेनलेस स्टील की छलनी के माध्यम से अलग कर दिया गया। कोशिकाओं को DMEM में 5% (v/v) FBS, 100 U/ml पेनिसिलिन, और 100 μg/ml स्ट्रेप्टोमाइसिन से 37 डिग्री सेल्सियस पर 95% O~2~/5% CO~2~ युक्त एक आर्द्रीकृत इनक्यूबेटर के तहत संवर्धित किया गया था। . कोशिकाओं को एकत्र किया गया, नई संस्कृति के व्यंजनों में फिर से बोया गया, और संगम तक पहुंचने तक सुसंस्कृत किया गया। कोशिकाओं को DMEM में 5% (v/v) FBS, 100 U/ml पेनिसिलिन, और 100 μg/ml स्ट्रेप्टोमाइसिन से युक्त किया गया था।

लीवर कैंसर सेल लाइन प्रमाणीकरण

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सेल लाइनों को डीएसएमजेड की सेल ऑथेंटिकेशन सर्विस (सूक्ष्मजीवों और सेल संस्कृतियों के जर्मन संग्रह, ब्राउनश्वेग, जर्मनी) के साथ-साथ उनके जीनोम-वाइड एसएनपी के विश्लेषण के अनुसार शॉर्ट टेंडेम रिपीट लोकी के मल्टीप्लेक्स पीसीआर प्रवर्धन का उपयोग करके प्रमाणित किया गया था। सेल लाइन स्क्रीनिंग सेवा (सीएलएस, रोश एप्लाइड साइंस, मैनहेम, जर्मनी) का उपयोग कर प्रोफ़ाइल।

एमटीएस परख

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सेल प्रसार 3-[4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-वाईएल]-5-[3-कार्बोक्सीमेथॉक्सीफेन द्वारा निर्धारित किया गया था


वह वीडियो देखें: What is the First Sign of Liver Cancer? Liver Cancer Awareness Discussion. Apollo Hospitals (जून 2022).

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